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即用型SABC-POD(兔IgG)試劑盒

即用型SABC三步法試劑盒

SA1029

4200元/100ml  

IHC

即用型SABC三步法試劑盒

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Product Brief

  • 產品概況

    產品貨號SA1029
    產品名稱即用型SABC-POD(兔IgG)試劑盒
    價格規格4200元/100ml
    保存條件4℃可保存一年,應避免冷凍。
    試劑盒內容:1. 5%BSA 封閉液:100ml。用于組織切片的封閉。
    2. 二抗:100ml。生物素標記山羊抗兔IgG。
    3. SABC:100ml。采用博士德所研究的獨特方法生產,復合物不僅有很強的信號放大作用,而且也非常穩定。


Instructions

工作原理

SABC 是專為免疫組化和其他免疫檢測而設計的,用以顯示組織和細胞中抗原分布。鏈霉親和素是一種從鏈霉菌中提取的蛋白質,分子量47000。同親和素一樣,對生物素分子有極高的親和力,是一般抗原抗體親和力的一百萬倍。親和素是一個堿性蛋白質(IP=10),經改造后可以轉變成中性蛋白質。鏈霉親和素等電點接近中性,IP=6.0~6.5,對組織和細胞的非特異吸附很低,基于鏈霉親和素的免疫組化方法背景很低。SABC 即StreptAvidin—BiotinComplex,。根據研究,SABC 大約可形成一百個左右的過氧化物酶和五十個左右的鏈霉親和素所構成的復合物。大量的酶將保證SABC 具有很高的敏感性。SABC 兼具高敏感性,低背景和操作簡便的優點。

使用說明

用戶自備試劑:
1.粘片劑APES 或POLY-L-LYSINE(博士德公司有售)。
2.免疫組化專用PBS(pH7.2-7.6)配法:1000ml 蒸餾水中加氯化鈉8.5g, Na2HPO4 2.8g,NaH2PO4 0.4g。如果用的是含水磷酸鹽,應加上分子式中水的含量。
3.0.01M 枸櫞酸鹽緩沖液:1000ml 蒸餾水中加枸櫞酸三鈉(C6H5Na3O7·2H2O)3g, 枸櫞酸(C6H8O7·H2O ) 0.4g。
4.DAB顯色試劑盒(博士德公司有售)。
免疫組化染色程序的選擇:用戶需根據抗原/抗體的特點確定程序,多數情況下要先比較各程序染色結果。
A 程序:石蠟切片熱修復抗原程序。促進某些位于蛋白質內部的位點暴露。
B 程序:石蠟切片酶消化程序。促進某些被固定遮避的抗原位點暴露。
C 程序:石蠟切片不消化/不修復程序。適于穩定的抗原。
D 程序:細胞涂片,冰凍切片染色程序。
A.石蠟切片熱修復抗原染色程序:
1. 載玻片防脫片劑處理:可選擇APES 或Poly-Lysine。撈片后置烤箱58-60 ℃30-60 分以使切片緊密粘附。
2. 切片常規脫蠟至水。
3. 30%H2O2 1 份+蒸餾水10 份混合,室溫5-10 分鐘以滅活內源性酶。蒸餾水洗3 次。
4. 熱修復抗原:將切片浸入0.01M 枸櫞酸鹽緩沖液(PH6.0),電爐或微波爐加熱至沸騰后斷電,間隔5-10 分鐘后,反復1-2 次。冷卻后PBS(pH7.2-7.6)洗滌1-2 次。
5. 滴加5%BSA 封閉液,室溫20 分鐘。甩去多余液體, 不洗。
6. 滴加適當稀釋的一抗(小鼠或兔IgG),37 ℃ 1 小時左右或20℃時2 小時左右。也可4℃過夜。PBS(pH7.2-7.6)洗2 分鐘×3 次。(一抗的稀釋度、孵育時間和溫度與染色強度、背景有直接關系。一般來說,陽性染色強度不夠時,可提高一抗濃度和延長孵育時間;背景過高時,可降低一抗濃度和縮短孵育時間。)
7. 滴加生物素化山羊抗小鼠IgG(或兔、人IgG),20-37℃ 20 分鐘。PBS(pH7.2-7.6)洗2分鐘×3 次。
8. 滴加試劑SABC,20-37℃ 20 分鐘。PBS(pH7.2-7.6)洗5 分鐘×4 次。
9. DAB 顯色:使用DAB 顯色試劑盒(AR1022)。取1ml 蒸餾水,加試劑盒中A,B,C 試劑各1 滴,混勻后加至切片。室溫顯色, 鏡下控制反應時間,一般在5-30 分鐘之間。也可自配顯色劑顯色。蒸餾水洗滌。
10. 蘇木素輕度復染。脫水,透明,封片。顯微鏡觀察。
B. 石蠟切片酶消化程序:
以下面的步驟代替A 程序中的第4 步:滴加復合消化液(博士德有售)5-10 分鐘。蒸餾水洗3 次。也可以使用0.1%的胰蛋白酶作消化液。
C. 石蠟切片不消化/不修復程序:
對于不需要微波修復或消化的抗原,省略A 程序中的第4 步即可。
D.血涂片,細胞和冰凍切片染色程序
1.載玻片經防脫片劑處理(Poly-L-Lysine)。抗凝血經分層離心后涂片;培養細胞也可涂片或貼片生長;冰凍切片室溫風扇吹干。
2.固定方案首選4%多聚甲醛或10%福爾馬林固定30 分鐘。
3. 30%H2O2 1 份+純甲醇50 份混合,室溫浸泡30 分鐘,以滅活內源性過氧化物酶。蒸餾水洗1-2 次。其余步驟和石蠟切片5-10 步相同。如果冰凍切片直接染色結果不理想時,可以參照石蠟切片對切片進行熱修復,方法和石蠟切片4-10 步相同。
注意事項:
1. 如果染色背景過高,在SABC 反應之后,DAB 顯色之前,用加有0.01—0.02% TWEEN20 的PBS(pH7.2-7.6)洗滌切片4 次,單純PBS 洗2 次,然后DAB 顯色。
2. 熱修復抗原可選0.01M 枸櫞酸鹽緩沖液(PH6.0);也可以使用PBS、TBS 等多種緩沖液。

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