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培養細胞總蛋白抽提試劑

蛋白抽提試劑,AR0103-10,AR0103-30,AR0103-100

分類:

免疫印跡檢測系統 - 蛋白抽提

說明書:

AR0103

38元/10ml  88元/30ml  198元/100ml  

WB

WB輔助試劑

現貨

總價格:

---元*1

選擇數量:

- +

Product Brief

  • 產品概況

    產品貨號AR0103
    產品名稱培養細胞總蛋白提取試劑
    價格規格¥38/10ml;¥88/30ml;¥198/100ml
    保存條件4°C一年有效。
    產品描述
    對于5×10^6個細胞的抽提樣品,本樣品可以抽提200次,本產品可在60分鐘的時間內完成蛋白的提取。
    需要材料

    蛋白酶和磷酸酶抑制

    劑2ml離心管

    能達到10000g的離心機

    細胞刮

    產品說明博士德的哺乳動物細胞蛋白抽提試劑用于從培養的哺乳動物細胞中高效抽提總可溶性蛋白。這款完整的細胞裂解試劑是一種非變性除垢劑配方,可在30分鐘內溶解細胞膜并抽提總可溶性細胞蛋白。這種哺乳動物細胞裂解試劑可以不需要從培養皿上剝離貼壁細胞,可以簡單而直接地在生長細胞的24孔和96孔板上進行裂解和分析。與很多下游分析都兼容,包括免疫分析、酶分析和各種常見的報告基因分析。


Instructions

注意事項:

1.溫和的除垢劑裂解,產生的抽提物直接與BCA蛋白定量分析試劑或SDS-PAGE兼容。

2.抽提的可溶性蛋白處于非變性狀態,可直接用于免疫沉淀反應和其他親和純化過程。

3.可透析,確保其與隨后的分析系統兼容。

4.貼壁細胞可直接在板上裂解。

5.試劑已在幾種不同類型的細胞系上進行了測試,包括COS-7,NIH3T3,Hepa1-6,293T,CHO等細胞。

6.蛋白質提取效率通常比凍融法和超聲波法高。

7.抽提蛋白的所有步驟都需在冰上或4℃進行。

 

使用方法:

注意:取適當量的裂解液,放與4℃預冷,使用前數分鐘內需加入酶抑制劑。

1.對于貼壁細胞,細胞刮刮下細胞,計數,并收集5×106 個細胞,600g 離心5分鐘,盡量吸盡上清,用預冷的PBS重懸細胞,600g 離心分鐘收集細胞,盡量吸盡上清,加入0.5ml的預冷的裂解液,用移液器吹打數下,冰上孵育30分鐘, 10000g離心10分鐘,取上清,即為蛋白提取物。

注意:可以直接將裂解液加入培養細胞的器皿中裂解細胞,具體操作如下,

A.用移液槍小心吸去培養液,

B.加入適量的預冷的PBS,

C.用移液槍小心吸去PBS,

D.按照下表加入裂解液,4℃孵育30分鐘。

E.將裂解液轉入離心管中, 10000g離心10分鐘,取上清,即為蛋白提取物。

板規格/表面積

試劑用量

100mm                      

500~1000ul

60mm

250~500ul

6-well   plate

200~400ul   per well

24-well   plate

100~200ul   per well

96-well   plate 

50~100ul   per well

 

2.對于懸浮細胞,計數,并收集5×106 個細胞,600g 離心5分鐘,盡量吸盡上清,用預冷的PBS重懸細胞,600g 離心5分鐘,盡量吸盡上清,加入0.5ml的預冷的裂解液,用移液器吹打數下,冰上孵育30分鐘, 10000g離心10分鐘,取上清,即為蛋白提取物。

常見問題:         

問題 

原因

解決方法

 

 

低蛋白的產出

蛋白表達低

轉染步驟再優化

試劑量不足

加入更多試劑

試劑不能滲透細胞膜

增加抽提時間,在抽提時搖動用力些


 

結果實例1:

4-4.png

如圖:細胞提取試劑提取不同細胞的蛋白,BCA測定蛋白濃度,上樣20ug,跑膠,轉膜,孵育博士德一抗,使用博士德發光顯色液顯影。

 

結果實例2:

5-5.png

依照本說明書操作,使用不同細胞得到的蛋白量。


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